制备供试液时应该考虑哪些问题？

医用玻璃容器不仅需要彻底消毒与灭菌处理，还需要彻底清除细菌内毒素。在内毒素检测中，供试液制备质量是检测成功的关键。卫生部先后对玻璃注射器和一次性注射器产品细菌内毒素检测供试液制备方法作出具体规定和要求，但前后两种制备供试液的方法有差异，本实验对两种方法制备的供试液对细菌内毒素检测结果的影响进行了比较。

1、药品微生物检验的特殊性

2、增修订内容

1）明确规定了供试液制备时使用水浴加热的温度和加热时间（温度为不大于45摄氏度。

2）明确规定了供试液从制备完毕到加入培养基的时间应不超过1小时

3）对非水溶性供试品，增订了使用十四烷酸异丙酯溶解供试液方法。

4）删除了2000版收载的所有稀释剂，增订了其他四种，分别为PH7。 0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液、0。9%无菌氯化钠溶液和PH6。8无菌磷酸盐缓冲液以及PH7。6无菌磷酸盐缓冲盐

3、非水溶性供试品制备方法

十四烷酸异丙酯法

适用范围：用于一法不能溶解，可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂供试品

十四烷酸异丙酯的用量同方法验证试验（无菌十四烷酸异丙酯的制备采用薄膜过滤法过滤除菌，选用孔径为0。

22μm的脂溶性滤膜，在140度干热灭菌2小时）：无菌十四烷酸异丙酯，将购买的十四烷酸异丙酯用0。22

取供试品10g，加至含20ml 无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。

然后加入45度PH7。 0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液100ml，振摇5~10min，萃取，静置使油水明显分层，取其水层为1：10的供试液

3、抑菌活性的供试品的拱试液制备方法。

1）、药物的抑（抗）菌作用

2）抑菌性药品检查的理由A、可逆性B、抗菌谱C、细菌的耐药性

3）抑菌药物判定：A、已知B、验证

5）制备方法

A、培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养机中使各单位体积内的供试品含量减少至不含抑菌作用减少，由于化学抑菌剂的抑菌效果与其浓度呈相关，即浓度越高，抑菌作用越强。

常用稀释法中和检品的抑菌性。不同抑菌性的浓度与其抑菌效力间的相关性不同，但对某一特定的抑菌剂来说，这种相关性是恒定不变的，二者呈指数关系，可用下式表示：

Gt=k

式中，C表示抑菌剂的浓度；t 表示杀灭标准试验菌所需要的时间；k是一个常数；浓度指数η，是lgt与lgC做图做得直线的斜率。

抑菌剂的η值越高，其抑菌作用越易。通过稀释而被中和掉，抑菌剂的η值越低则越难通过稀释法来中和消除其抑菌力。

本法适用抑菌作用不强的各类中西药制剂。

方法：取同稀释级的供试液2ml，每1ml等量分注5个平皿，倾注培养基混匀，培养计数，分别计算5个平皿的平均菌落数，计算每1ml供试品的平均菌落数，按计数规则报告菌数。

B、离心沉淀集菌法

1 ） 原理；利用质量和比量的不同

2）溶液剂及可溶于水的固体供试品：3000转/分离心20分，弃上留底液2ml。

3）难容于水的固体供试品：500转/分离心5分，弃上留底。

6）抑菌作用弱的固体供试品；也可一次低速离心取上层液直接入培养基。 。